بروتوكول عزل DNA يدويا

1- يتم وضع 800 ميكروليتر من محلول الاستخلاص في ابندورف في Shaking Water bath حتي طحن العينة .

2- يتم طحن العينة بالنيتروجين السائل ويجب وضعه علي العينة 3 مرات حتي تتحول لبودر

3- يتم ازالة الابندورف ووضع العينة النباتيه  بها ثم نضعها علي جهاز Vortex

 لمدة 20 ثانية حتي تختلط العينه بالمحلول جيدا ثم نضعها مرة اخري في Shaking Water bath علي 65˚م  لمدة 30 دقيقة .

4- نترك العينة لتبرد ثم نضع عليها نفس الحجم (800)  كلوروفورم / ايزواميل والتقليب جيدا ثم نضعها في جهاز Centrifuge علي 10 الاف لفة لمدة 10 دقائق .

5- يتم سحب الطبقة العليا  ووضعها في أنابيب ابندورف واضافة 400 ميكروليتر من الايزوبروبانول ( 2/3 الحجم بالانبوبة ) والتقليب جيدا . نلاحظ ظهور خيوط بالانبوبة , يتم وضعها في الفريزر لمدة 10 دقائق لسهولة ترسيبها  .

6- توضع في جهاز Centrifuge علي 8 الاف لفة لمدة 10 دقائق .

7- يتم سحب الجزء العلوي والاحتفاظ بالراسب ثم نضعها مقلوبة علي منديل حتي نتخلص من الايزوبروبانول .

8- يوضع علي الراسب 400 ميكروليتر من Washing Buffer  والتقليب بلطف , ثم نضعها في جهاز Centrifuge علي 8 الاف لفة لمدة 1 دقيقة  .

9- يتم سحب الجزء العلوي والاحتفاظ بالراسب ووضع Washing Buffer وهو 70 % ايثانول ثم تمام التجفيف .

10- نضع 100 ميكروليتر من محلول الذوبان او يمكن استخدام ماء مقطر معقم سبق تعقيمة في ابندورف معقمة , ثم الطرد المركزي لمدو 2 دقيقة علي 8 الاف لفة .

11- للاحتفاظ بــ DNA يتم وضعة في الفريزر لحين استخدامة .

لجريان DNA يتم وضع 1 ميكروليتر صبغه : 2 ميكرو DNA : 3 ميكرو ماء مقطر .